金黄色葡萄球菌的检测方法和操作步骤

1、增菌培养法

(1)样品处理：按无菌操作取25g(ml)样品，加入225mL灭菌生理盐水，将固体样品研磨或置于均质机中制成悬浮液。

(2)增菌分离培养：吸取上述悬液5ml，接种于含7.5%氯化钠肉汤或胰酶干酪和大豆角肉汤的50mL培养基中，36和1培养24h，然后移植血平板和Baird-Parker平板，36和1培养24h，挑取血平板上金黄色(有时为白色)菌落进行革兰氏染色镜检和血浆凝固酶试验。

(3)形态学：该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄球状，无芽孢和荚膜。致病性葡萄球菌很小，直径约为0.5um ~ 1um。

(4)在肉汤里生长浑浊，有时胰脏和膝盖的大豆肉汤里液体清澈，细菌量大时生长浑浊。血平板上的菌落呈金黄色，有时呈白色，大而突出，圆形，不透明，光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上，呈圆形，光滑，凸起，湿润，直径2mm——3mm，颜色为灰黑色，边缘较浅，周围有浑浊带，外层有透明环。接种针接触的菌落好像有奶油口香糖的硬度，偶尔会碰到类似的不溶脂的菌落；但是没有浑浊带和透明图。长时间保存的冷冻或干燥食品中的孤立菌落比典型菌落产生的黑色浅，外观可能粗糙干燥。

(5)血浆凝固酶试验：将1: 4的新鲜兔血浆0.5mL吸入小试管中，再加入培养24小时的金黄色葡萄球菌肉浸肉汤0.5mL。摇匀后置于36和1的培养箱或水浴中，每半小时观察一次，共6小时。如果出现凝结，即试管倾斜或倒置时，则认为是阳性结果。同时，已知的阳性和阴性葡萄球菌菌株和肉汤用作对照。

2.直接计数法6.2.1吸取上述1: 10悬浮液，依次稀释10倍。根据样品的污染情况，选择1mL不同浓度的稀释溶液，分别加入三个Baird-Parker平板，每个平板的接种量为0.3mL、0.3mL、0.4mL，然后用灭菌的L-bar将整个平板包被。如果太多的水难以吸收，将板放置在36和1下放置1h。水分蒸发后，将平板倒置，置于36和1培养。

在三个平板上计数周围有浑浊带的黑色菌落，从中挑取五个菌落，分别接种于血平板。36和1培养24h后，进行染色镜检和血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养。

3.菌落计数：将三个平板中疑似黑色金黄色葡萄球菌菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以5，再乘以稀释倍数，得到每克样品中金黄色葡萄球菌的数量。