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1. 发光剂的选择。

2. 被标记蛋白质的性质：选用较高的纯度和免疫学稳定性的抗原进行标记;抗体作为被标记物时，则要求具有较高的效价，应用提纯的IgG来代替全血清。

3. 选择正确的标记方法。

4. 原料比：IgG：发光剂：交联剂的克分子比(mol:mol:mol)会影响结合物的发光效率。

5. 标记率：结合物中IgG与发光剂之间的克分子比。

6. 温度：尽量选择较低的温度，以避免蛋白质在标记过程中活性的丧失。

7. 纯化与保存：通过透析法、凝胶过滤法和盐析沉淀法等进行纯化。结合物一般可分装保存在-70℃条件下，最好冷冻干燥保存。