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1. 时间分辨

正常组织在激发光照射下可以发出一定波长的荧光，但该荧光寿命较短(1～10ns)，而镧系元素螯合物的荧光寿命较长(10～1000μs)。故待短寿命背景荧光完全衰变后再测定镧系元素离子螯合物的特异性荧光信号。

2. Stokes位移：激发光谱和发射光谱的波长差，如果Stokes位移小，激发光谱和发射光谱常有重叠，相互干扰，影响检测结果的准确性。镧系元素位移大。

3. 发射光谱和激发光谱：镧系元素发射光谱带较窄，多在613nm±1Onm。利用滤光片只允许此波段的荧光通过，避免干扰。

4. 荧光标记物的相对比活性：比活性是指单位时间内每个标记分子可被探测到的信号量。

5. 信号增强

Eu3+标记抗原抗体复合物在弱碱性溶液中被激发后的荧光信号较弱，加入一种酸性增强液可使Eu3+从复合物上完全解离下来，并与另一种螯合剂所螯合，以增强荧光信号。