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葡萄糖氧化酶法在日常生活中可能听不到,其实葡萄糖氧化酶法是一种检测患者是否血糖高、是否患糖尿病的检查方法,在医院里一般是比较广泛的,如果血糖高或者是糖尿病患者用葡萄糖氧化酶法检测结果是非常准确的,下面就介绍一下葡萄糖氧化酶法。
葡萄糖氧化酶测定血糖浓度的详细介绍
【基本原则】
葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GOD)利用氧和水把葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并释放出过氧化氢。当色原性氧受体存在时,过氧化物酶(peroxidase,POD)将过氧化氢分解成水和氧,同时色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合成为红色的醌类化合物,即Trinder反应。红醌的产生与葡萄糖的含量成正比。
【毒剂】
1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g和无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中,用1mol/l氢氧化钠(或1mol每L盐酸)调到7.0,蒸馏水定容至1L。
2.采用葡萄糖氧化酶1200U、葡萄糖氧化酶1200U、4-氨基安替比林10mg、叠氮钠100mg、磷酸盐缓冲液80ml中,以1mol/LNaOH调pH至7.0,以磷酸盐缓冲液定容至100ml,置4℃保存,可稳定使用3个月。
3.酚液将重蒸馏酚溶于100ml蒸馏水中,以棕色瓶储存重蒸馏酚。
4.酶试剂与酚液等比例混合,4℃可存放1个月。
5.12mmol/L苯甲酸溶液溶解于蒸馏水800ml左右的苯甲酸溶液中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至lL。
6.100葡萄糖标准贮藏液称取已干燥恒重1.802g,溶于12mmol/L苯甲酸溶液70ml左右,以12毫摩尔/L苯甲酸溶液溶解,12毫ol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2小时后可使用。
7.5葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放入容量100ml瓶中,用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。
【临床意义】
1.可见生理性高血糖摄入高糖食物后,或情绪紧张肾上腺分泌增多。
2.病理性高血糖
(1)糖尿病:病理性高血糖常发生在绝对或相对不足的糖尿病患者中。
(2)内分泌腺功能紊乱:甲状腺亢进、肾上腺皮质功能亢进和髓质功能亢进。各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会导致高血糖。关注因激素增多而引起的升高血糖的高血糖,现在属于特异型糖尿病。
(3)颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4)脱水导致的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也会导致血糖轻微升高。
3.生理性低血糖多发生在饥饿和剧烈运动中。
4.病理性低血糖(特发性功能性低血糖最常见,依次为药物、肝源性、胰岛素瘤等)
(1)胰岛素分泌过多,如胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等。
(2)抑制胰岛素的激素分泌不足,如脑垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退,导致生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3)肝病严重的病人,由于肝脏储存的糖原和糖异生等功能低下,肝脏无法有效地调节血糖。
[注解]
1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖的特异性很高,葡萄糖中约36%为α,64%为β。葡萄糖完全氧化需要α型变旋反应为β型。在国外,葡萄糖氧化酶试剂盒中含有葡萄糖变旋酶,可以加速这一反应,但在终点法中,延长培养时间,可以达到自发变化的完成。由于新配制的葡萄糖标准液主要为α型,因此需放置2小时以上(最好过夜),待变旋平衡后才能使用。
2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。由于尿液中的干扰物质如尿酸等浓度过高,会干扰过氧化物酶反应,造成假性低。
3.以草酸钾-氟化钠为抗凝剂测定标本效果较好。测定草酸钾6g,氟化钠4g。加入水溶解到100ml。取0.1ml于试管内,在80℃以下烘乾使用,可使2~3ml血液在3~4天内不凝固,抑制糖的分解。
4.本方法用血量微量,操作时应直接加标本于试剂中,再吸试剂反复冲洗吸管,确保结果可靠。
5.黄疸、溶血和乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,再进行检测。
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